Для чего мажут йодом пятки: Вы удивитесь, зачем на ночь мажут пятки йодом

от чего помогает, правила нанесения

Йодный раствор является одним из самых доступных и широко применяемых антисептиков. Он обладает свойством проникать посредством пор в подкожные ткани и оказывать на организм положительное воздействие. Многие люди и даже врачи рекомендуют мазать йодом пятки. Они утверждают, что таким образом можно значительно улучшить состояние здоровья.

Фармакологические свойства йода

Раствор обладает мощными противомикробными свойствами. В маленькой концентрации оказывает местнораздражающее действие, в большой — прижигающее.

Иные свойства раствора:

• Противовоспалительное.
• Гиполипидемическое.
• Отвлекающее.

Чистый йод — это твердое вещество (пластинки или кристаллы) черно-серого цвета, имеющее специфический запах. В состав раствора, помимо него, входит этанол 96 %, йодид калия и очищенная вода.

Вещество, поступая в организм, избирательно поглощается щитовидной железой. Через некоторое время он выводится с помощью почек, кишечника, а также потовых и молочных желез.

Зачем мазать йодом пятки?

Согласно многочисленным отзывам, нанесение раствора на ступни в виде сетки помогает избавиться от различного рода заболеваний и патологических состояний, развитие которых спровоцировано нарушениями функционирования щитовидной железы. Она отвечает за работу сердечно-сосудистой, выделительной, иммунной, дыхательной систем. Кроме того, щитовидка регулирует обменные процессы. Нормальное функционирование эндокринной системы напрямую зависит от количества йода, поступающего в организм. Если его недостаточно, развиваются всевозможные патологии.

Детские психологи в Белгороде: обзор специалистов,…

Как найти лучшего детского психолога в Белгороде? Таким вопросом задаются все родители,…

От чего помогает йодная сетка на пятках:

• Избавляет от напряжения, вызванного стрессом.
• Улучшает настроение.
• Способствует преодолению апатии и избавлению от переживаний навязчивого характера.
• Снимает раздражительность, нормализует психоэмоциональный фон.

Все вышеперечисленные симптомы являются признаками нарушения функционирования щитовидной железы, вызванного дефицитом йода. Когда его недостаток восполняется, состояние человека значительно улучшается.

Многие люди интересуются, полезно ли мазать пятки йодом при заболеваниях других внутренних органов. Специалисты утверждают, что при воздействии на биологически активные точки многие недуги также отступают.

Правила применения

Первоначально рекомендуется провести специфический тест. На основании его результатов можно сделать вывод о том, является ли причиной того или иного недуга дефицит йода. Нужно нанести на ступни раствор в виде сетки и надеть носки. Результат необходимо оценить утром. Если кожный покров будет чистым, это свидетельствует о недостатке йода в организме. Наличие сетки более суток говорит о том, что заболевание имеет иную причины и бороться с ним с помощью раствора нецелесообразно.

Детские психологи в Белгороде: обзор специалистов,. ..

Как найти лучшего детского психолога в Белгороде? Таким вопросом задаются все родители,…

Правила применения йода:

1. Рисовать сеточку нужно только на сухой и предварительно очищенной коже. Делать это необходимо с помощью ватной палочки. Движения не должны быть агрессивными, достаточно незначительно надавливать на кожу.
2. Длина одной стенки клетки в сетке не должна превышать 1 см.
3. Йодный раствор не наносится при наличии нарушения целостности кожного покрова. Сетка рисуется только на здоровой ткани.
4. Запрещено мазать пятки йодом при наличии повышенной температуры тела.
5. Лицам, имеющим склонность к развитию аллергических реакций, необходимо предварительно провести тест на степень чувствительности тканей к йоду. Для этого нужно капельку раствора нанести на внутреннюю сторону запястья. Если признаки аллергической реакции не появятся в течение суток, можно мазать йодом пятки.
6. Процентное содержание активного компонента должно быть 5 %, для детей — не более 2,5 %. Использование высококонцентрированного раствора может негативным образом сказаться на самочувствии.

Чтобы процедура принесла максимум пользы, необходимо наносить йодную сетку в зонах локализации биологически активных точек. Если человек, например, страдает от болезненных ощущений в шее, йод нужно наносить на основание большого пальца ноги.

Иные точки на ступнях, отвечающие за органы:

• Лобные пазухи — кончики пальцев ног.
• Головной мозг — середина большого пальца.
• Точка, воздействие на которую понижает давление — ниже основания большого пальца.
• Глаза — основание указательного и среднего.
• Уши — чуть ниже безымянного и мизинца.
• Щитовидная железа — на 2-3 см ниже основания большого пальца.
• Легкие, бронхи — зона на 2-4 см ниже основания среднего, безымянного и мизинца.
• Сердце — точка на 4 см ниже безымянного пальца и мизинца.
• Печень, селезенка, желчный пузырь, почки, поджелудочная железа, желудок — середина ступни.
• Тонкий и толстый кишечник — на 4 см выше пятки.
• Половые органы — пятка.

Точки на обоих ступнях абсолютно симметричны.

Цитоархитектоника коры головного мозга: определение и…

Кора головного мозга является наиболее сложной структурой человеческого мозга. Он обладает широким…

Стоит отметить, что мазать йодом пятки можно и беременным женщинам. Это не вредит ребенку и является отличной профилактикой нарушений, связанных с дефицитом вещества.

Варианты использования

Самый популярный способ применения йода — нанесение раствора на ступни в виде сетки. Можно также попробовать следующие действенные рецепты:

1. Взять 300 мл чистого медицинского спирта, по 10 мл йода и камфоры, 10 предварительно измельченных таблеток «Аспирина». Тщательно смешать компоненты. Дать настояться 3 недели. Затем ежедневно рисовать сетку на ступнях.
2. Взять в равных пропорциях раствор йода и лимонный сок. Смесь перелить в темный флакон и убрать в холодильник. Делать сетку ежедневно.
3. Взять в равных пропорциях теплый мед, раствор йода и медицинский спирт. Тщательно смешать компоненты. Дать настояться 2 часа. Нарисовать на ступнях сетку.

Важно знать о том, что не только йод, но и остальные компоненты являются потенциальными аллергенами. Лицам с повышенной чувствительностью рекомендуется заблаговременно провести тест на внутренней стороне запястья.

Польза

Самое главное — йод нормализует работу щитовидной железы, нарушения которой негативным образом сказываются на функционировании всех органов.

Положительное воздействие на организм:

• Купируются воспалительные процессы.
• Ускоряется метаболизм.
• Нормализуются обменные процессы.
• Улучшается работа внутренних органов.
• Нормализуется психоэмоциональное состояние.
• Купируются болезненные ощущения.

Таким образом, мазать йодом пятки весьма полезно.

Противопоказания

Как было упомянуто выше, проводить процедуру при наличии повышенной температуры тела запрещено. Кроме того, недопустимо рисовать йодную сетку на коже детей, возраст которых менее трех лет. Малышам постарше необходимо предварительно проводить тест на чувствительность.

В заключение

Согласно многочисленным отзывам, мазать йодом пятки крайне полезно. Действующее вещество способно проникать в ткани и оказывать на них положительное воздействие. Кроме того, на фоне восполнения недостатка йода в организме нормализуется работа щитовидной железы.

Государственное унитарное предприятие «Медицинская техника и фармация Татарстана»

7 ноября 2019 г., четверг

       Уже давно в России используют такой метод, как йодная сетка. Считается, что она помогает при простуде, ушибах, нехватке йода… Спектр её использования очень широк. Но так ли она полезна? И при каких проблемах она станет настоящим спасением?

      Йодная сетка по-научному называется йодотерапией. Этот метод предложил использовать доктор Колбасенко из Санкт-Петербурга более 100 лет назад. Врач предположил, что йод проникает глубоко в ткани, действуя на патологические процессы и останавливая их.

 

    Йод обычно используют для обработки кожи вокруг раны или пореза. Это оказывает дезинфицирующий эффект, избавляя рану от вредоносных микроорганизмов. Также йод может заживлять ранки, снять воспалительный процесс, проникая в глубину тканей, и разогреть ткани за счёт раздражения кожных рецепторов и усиления кровообращения в месте нанесения.

 

      Для йодной сетки нужен 5% раствор йода. В пузырек макают ватную палочку или списку с ваткой, после чего аккуратно рисуют ей линии. Так нужно образовать квадратики, стороны которых по длине должны быть не больше сантиметра.

 

      Обязательно надо проверить, нет ли у того, кому рисуется йодная сетка, аллергии на йод. Для этого проводят палочкой с йодом по внутренней стороне предплечья и выжидают полчаса. Аллергия может проявиться в виде красноты, высыпаний, раздражения, волдыри.  Если их нет, то йодную сетку можно делать.

 

      Процедуру лучше делать перед сном. Кожа должна быть сухой и без повреждений.

Не стоит слишком увлекаться и делать йодную сетку каждый вечер.

 

      Во-первых, йодная сетка помогает при ударах и ушибах. Ей можно убрать синяки, ушибы. Но отеки от йодной сетки не уйдут. Поэтому сначала надо на травмированную область положить холод, чтобы снять отек, а только на следующий день рисовать сетку.

 

      Во-вторых, йодную сетку используют при простудных заболеваниях. Её обычно выполняют на носу, захватывая переносицу и крылья носа. Лучше всего рисовать очень тонкими линиями, так как кожа в этой части очень тонкая и можно легко обжечься. Также при простуде помогает сетка на ногах – ступнях и икрах.

 

      В-третьих, йодная сетка помогает избавиться от кашля (но только сухого). Её следует рисовать на груди.

 

      В-четвёртых, если у вас варикоз, то йодная сетка будет как нельзя кстати. Она поможет убрать отёчность, уменьшить болезненность, снять усталость в ногах.

 

      В-пятых, йодную сетку можно использовать и при суставных болях, болях в мышцах и спине. Правда, суставы рекомендуется распарить перед нанесением йода.

 

      Также йодная сетка помогает при растяжении связок, маститах, кожных воспалениях, тромбозах, ангинах, невралгиях.

 

Источник: https://www.medikforum.ru/medicine/84804-babushkin-metod-pomogaet-li-yodnaya-setka.html

Поделиться:

ЧИТАТЬ ВСЕ НОВОСТИ

Gram Stain Kit (нестабилизированный йод)

Артикул ES801

$81.18

Возможны скидки за количество

(0)Пока нет отзывов

Количество

• Детали

Детали

Набор для окрашивания по Граму (нестабилизированный йод) предназначен для окрашивания бактерий из культур или клинических образцов с помощью дифференциального четырехэтапного метода окрашивания по Граму. Грамположительные и грамотрицательные бактерии окрашиваются кристаллическим фиолетовым. Добавление йода приводит к образованию комплекса кристаллический фиолетовый-йод внутри клеточной стенки. Обесцвечиватель извлекает липиды из клеточной стенки грамотрицательных бактерий, тем самым увеличивая пористость клеточной стенки и позволяя комплексу кристаллический фиолетовый-йод диффундировать из клетки. В то же время грамположительные бактерии обезвоживаются, что приводит к уменьшению пористости клеточной стенки и улавливанию комплекса кристаллический фиолетовый-йод внутри клетки. Из-за увеличения пористости сафранин проникает через клеточную стенку грамотрицательных бактерий.

Условия хранения:
Хранить при контролируемой комнатной температуре (15-30°C) в плотно закрытых бутылках. Рабочий раствор с граммовым йодом (набор с нестабилизированным йодом) стабилен в течение трех месяцев после смешивания. Набор для окрашивания по Граму со стабилизированным йодом стабилен в течение установленного срока годности. * Если в растворе кристаллического фиолетового образуется осадок, осторожно нагрейте его до 37ºC и хорошо встряхните для повторного растворения.

Сбор и подготовка образцов:
Жидкая среда: Распределите суспензию бактерий на чистом предметном стекле с помощью стерилизованной проволочной петли и дайте высохнуть на воздухе. Нагрейте мазок, трижды пропустив предметное стекло через пламя, и дайте ему остыть.
Твердая среда: Поместите петлю деионизированной воды на чистое предметное стекло. Прикоснитесь стерилизованной проволочной петлей к колонии и подвесьте клетки в капле воды; распространение подвески на слайде и дайте высохнуть на воздухе. Нагрейте мазок, трижды пропустив предметное стекло через пламя, и дайте ему остыть.
Пациент: возьмите образец пациента с помощью стерильной проволочной петли, пипетки или тампона. Нанесите образец на чистое предметное стекло и дайте высохнуть на воздухе. Нагрейте мазок, трижды пропустив предметное стекло через пламя, и дайте ему остыть.

Препарат для окрашивания по Граму йода (набор для окрашивания по Граму ES801 – нестабилизированный йод)
Добавьте концентрат йода в разбавитель йода и хорошо перемешайте. Этот раствор следует выбросить через три месяца с даты приготовления.

Предоставленные материалы:
Один 8 унций. каждая бутылка кристаллического фиолетового, обесцвечивателя, сафранина и 4 унции. нестабилизированный концентрат йода
8 унций. бутылка-дозатор и разбавитель входят в комплект для смешивания рабочего раствора йода
. В комплект также входят подробный листок-вкладыш и удобные крышки с носиком

Необходимые и не поставляемые материалы:
Деионизированная вода
Предметные стекла для микроскопа
Штатив для окрашивания
Пинцет
Иммерсионное масло

Дополнительные материалы:
Предметные стекла для контроля окраски – Две зоны, содержащие грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы, с дополнительными 8 зонами для применения неизвестных образцов.
ESCS-140 10 шт. в коробке
ESCS-141 50 шт. в коробке

Процедура:
1. Поместите подготовленное предметное стекло на штатив для окрашивания над раковиной.
2. Залейте подготовленное предметное стекло красителем Crystal Violet Stain и оставьте на одну минуту. Аккуратно промойте слайд деионизированной водой.
3. Залейте предметное стекло рабочим раствором йода по граммам и дайте постоять в течение одной минуты. (При использовании стабилизированного йода залейте предметное стекло раствором и дайте постоять примерно две минуты). Аккуратно промойте слайд деионизированной водой.
4. Удерживая предметное стекло вертикально, аккуратно промойте предметное стекло раствором для обесцвечивания в течение примерно десяти секунд или до тех пор, пока обесцвечивающий раствор не станет прозрачным с предметного стекла. Аккуратно промойте слайд деионизированной водой.
5. Залейте предметное стекло красителем Safranin Stain и оставьте на одну минуту. Аккуратно промойте предметное стекло деионизированной водой и промокните предметное стекло насухо впитывающей бумагой. Осмотрите предметное стекло под масляной иммерсией.

Результаты:
Грамположительные бактерии окрашиваются в пурпурный цвет, а грамотрицательные — в розовый или красный.

Ограничения процедуры:
Применение чрезмерного тепла во время фиксации мазка может привести к разрыву клеточных стенок бактерий и повлиять на результаты окрашивания по Граму. Лечение антибактериальными препаратами может привести к тому, что некоторые грамположительные бактерии станут грамотрицательными.

Контроль качества:
Эффективность набора для окрашивания по Граму можно контролировать с помощью контрольных слайдов для окрашивания по Граму или следуя этой процедуре для тестирования каждого компонента набора: Фиолетовое окрашивание, оставляемое на одну минуту и ​​растворяющееся в деионизированной воде. Должны наблюдаться грамположительные фиолетовые кокки; если нет, откажитесь от этого решения. Окрасьте подготовленное предметное стекло Escherichia coli из 18–24-часовой культуры красителем Safranin Stain, дайте постоять в течение одной минуты и подняться с деионизированной водой. Должны наблюдаться грамотрицательные розовые палочки; если нет, откажитесь от этого решения. Следуя обычной процедуре окрашивания по Граму, окрасьте подготовленный слайд S.aureus из 18–24-часовой культуры. Следует наблюдать грамположительные фиолетовые кокки; в противном случае утилизируйте рабочий раствор йода в граммах.

Документация по продукту:
Инструкции по продукту

 

Рейтинги и обзоры

Нет обзоров

Будьте первым, кто напишет отзыв

1.10: Gram S тейн — Биология LibreTexts

1. Последнее обновление

2. Сохранить как PDF

Page ID

• Розанна Хартлин
• Колледж Уэст -Хиллз Lemoore

Цели обучения

• Объяснить важность окрашивания по Граму в здравоохранении и микробиологии.
• Дайте определение «дифференциальному пятну» и сравните его с «простым пятном».
• Определите окраску по Граму как тип дифференциальной окраски
• Расскажите, что окраска по Граму говорит нам о различных видах бактерий.
• Исследование клеток, окрашенных по Граму, и интерпретация того, являются ли клетки грамположительными или грамотрицательными.
• Определение морфологии клеток бактерий.
• Опишите строение клеточных стенок грамположительных клеток.
• Опишите строение клеточных стенок грамотрицательных клеток.
• Определите структуры грамположительных клеточных стенок и грамотрицательных клеточных стенок на диаграммах моделей клеточных стенок.
• Успешно провести окрашивание по Граму и дифференцировать клетки на грамположительные и грамотрицательные.
• Назовите каждый краситель/реагент окрашивания по Граму и объясните его функцию и то, как он будет взаимодействовать со стенками грамположительных и грамотрицательных клеток во время процедуры окрашивания по Граму.
• Устраните неполадки, связанные с неудачными окрашиваниями по Граму, и объясните, как можно исправить ошибки.

 

Дифференциальное окрашивание

Микробиологи обычно проводят дифференциальное окрашивание , так как это позволяет им собрать дополнительную информацию о бактериях, с которыми они работают. При дифференциальном окрашивании используется более одного красителя, и клетки разных видов бактерий могут иметь разный внешний вид в зависимости от их химических или структурных свойств. Некоторыми примерами дифференциального окрашивания являются окрашивание по Граму, кислотоустойчивое окрашивание и окрашивание эндоспор.

 

Таблица 1: Краткое описание некоторых распространенных дифференциальных красителей, используемых в микробиологии. Для окрашивания по Граму используются следующие красители/реагенты: кристаллический фиолетовый, йод по Граму, этанол и сафранин. Окрашивание по Граму различает клетки по типу клеточной стенки (грамположительные или грамотрицательные). Грамположительные клетки окрашиваются в пурпурно-фиолетовый цвет. Грамотрицательные клетки окрашиваются в розовый цвет. Для кислотостойкой окраски используются следующие красители: основной фуксин и метиленовый синий. Кислотоустойчивое окрашивание используется для различения кислотоустойчивых бактерий (выявляет структуру клеточной стенки определенных типов бактерий, помимо грамположительных и грамотрицательных). Кислотоустойчивые бактерии кажутся прочитанными, а некислотоустойчивые бактерии кажутся синими. Для окрашивания эндоспор используются следующие вещества: тепло, малахитовый зеленый и сафранин. Окрашивание эндоспор используется для различения видов бактерий, образующих и не образующих эндоспоры. Эндоспоры (если они есть) кажутся голубовато-зелеными, а все остальные клетки/клеточные структуры кажутся розовыми. Для окрашивания жгутиков используются следующие красители/реагенты: протрава из дубильной кислоты или калиевых квасцов, парарозалин или основной фуксин. Окрашивание жгутиков используется для визуализации жгутиков (если они есть). Для окрашивания капсул используются следующие красители: тушь или нигрозин (окрашивает фон, а не клетки) и контрастное окрашивание. Результат показывает, что фон темный, клетки цвета контрастного окрашивания, а капсула (если она присутствует) выглядит прозрачной. Окрашивание капсул определяет, есть ли у бактерий капсулы или нет. Капсулы выглядят как прозрачные ореолы вокруг окрашенных клеток.

 

Окраска по Граму показывает различия в структурах клеточных стенок

Окраска по Граму, разработанная Кристианом Грамом в 1884 году, является наиболее широко используемой дифференциальной окраской в ​​бактериологии. Большинство бактерий делятся на две основные группы — грамположительные бактерии и грамотрицательные бактерии в зависимости от состава клеточной стенки. Знание реакции Грама клинического изолята (выделенных видов бактерий от пациента) может помочь медицинскому работнику поставить диагноз и выбрать подходящий антибиотик для лечения.

Рис. 1: (Вверху) Микроскопические изображения бактерий, окрашенных по Граму. (Вверху справа) Виды грамположительных бактерий окрашиваются в фиолетовый цвет при окрашивании по Граму. (Вверху слева) Грамотрицательные виды бактерий окрашиваются в розовый цвет при окраске по Граму. (Внизу) Диаграммы, иллюстрирующие основные структурные компоненты клеточных стенок грамположительных бактерий и клеточных стенок грамотрицательных бактерий. (Внизу справа) Виды грамположительных бактерий имеют толстый слой пептидогликана за пределами плазматической мембраны. (Внизу слева) Виды грамотрицательных бактерий имеют тонкий слой пептидогликана снаружи плазматической мембраны с наружной мембраной снаружи слоя пептидогликана. В наружную мембрану стенок грамотрицательных клеток встроены липополисахариды (ЛПС), которые не показаны на этой диаграмме.

 

Результаты окрашивания по Граму отражают различия в составе клеточной стенки. Грамположительные клетки имеют толстые слои пептидогликана (вещества, состоящего из углеводов и белковых субъединиц) в клеточных стенках. Грамотрицательные бактерии имеют очень мало пептидогликана. Грамположительные бактерии также содержат тейхоевые кислоты, а грамотрицательные – нет. Грамотрицательные клетки имеют наружную мембрану, напоминающую фосфолипидный бислой плазматической мембраны. Наружная мембрана содержит липополисахаридов (ЛПС) , которые высвобождаются в виде эндотоксинов при гибели грамотрицательных клеток. Это может беспокоить человека с инфекцией, вызванной грамотрицательным микроорганизмом.

Рисунок 2: Детальный вид структуры клеточных стенок бактерий для грамположительных и грамотрицательных видов. (Слева) Стенки грамположительных клеток состоят из толстого слоя пептидогликана (PG) снаружи клеточной плазматической мембраны (PM) с тейхоевой кислотой (TA) и липотейхоевой кислотой, встроенной в слой пептидогликана. (Справа) Стенки грамотрицательных клеток состоят из тонкого слоя пептидогликана (PG) снаружи клеточной плазматической мембраны (PM). Грамотрицательные клеточные стенки имеют внешнюю мембрану (ОМ) за слоем пептидогликана, содержащую липополисахарид (ЛПС), а также пориновые каналы, которые позволяют некоторым материалам проходить через внешнюю мембрану. В грамположительных и грамотрицательных типах клеточных стенок также обнаружен липопротеин (ЛП).

 

Окрашивание по Граму лучше всего проводить на свежей культуре. Старые клетки могут иметь поврежденные клеточные стенки и не давать правильную реакцию Грама. Кроме того, некоторые виды известны как Грам-переменные , поэтому на предметном стекле могут быть видны как грамположительные, так и грамотрицательные реакции.

Хотя подавляющее большинство бактерий являются либо грамположительными, либо грамотрицательными, важно помнить, что не все бактерии можно окрасить с помощью этой процедуры (например, Mycoplasma sp., не имеющие клеточной стенки, плохо окрашиваются по Граму).

 

Как работает окраска по Граму

При окраске по Граму используются четыре красителя/реагента: кристаллический фиолетовый, йод по Граму, этанол и сафранин. Кристаллический фиолетовый (первичный краситель ) входит в состав пептидогликана всех бактерий, придавая им пурпурную окраску. Следующим красителем является йод по Граму, протрава , который в сочетании с кристаллическим фиолетовым образует более крупный комплекс в стенке пептидогликана. Следующий шаг — самый важный. Этанол, используемый в качестве обесцвечивателя, удаляет комплексы кристаллический фиолетовый/йод с тонких пептидогликановых слоев грамотрицательных клеточных стенок, но не с толстых пептидогликановых слоев грамположительных клеточных стенок. Продолжительность этапа обесцвечивания этанолом будет иметь важное значение для получения наилучших результатов окрашивания по Граму. После этапа обесцвечивания грамположительные клетки по-прежнему сохраняют пурпурный кристаллический фиолетовый цвет, а грамотрицательные клетки теряют пурпурный цвет и становятся прозрачными. Мы по-прежнему хотим видеть грамотрицательные клетки и уметь отличать их от грамположительных клеток. Сафранин называют контрастным красителем, поскольку он используется для окрашивания теперь уже бесцветных грамотрицательных клеток в розовый цвет.

Рис. 3: Обзор процедуры окрашивания по Граму и изменение цвета клеток на каждом этапе. (1) Применение кристаллического фиолетового окрашивает все клетки в фиолетовый цвет. (2) Нанесение йода Грама не меняет цвет клеток (все клетки остаются фиолетовыми), но это приводит к тому, что кристаллический фиолетовый прочно прилипает к стенкам грамположительных клеток, но не к стенкам грамотрицательных клеток. (3) Стадия спирта (этанола) представляет собой стадию обесцвечивания. Этанол удаляет кристаллический фиолетовый из грамотрицательных клеток, но не из грамположительных. После этого шага грамположительные клетки останутся фиолетовыми, а грамотрицательные — прозрачными. (4) Сафранин представляет собой красновато-розовое пятно, которое окрашивает прозрачные клетки (грамотрицательные клетки) в розовый цвет. После этого шага грамположительные клетки по-прежнему будут фиолетовыми, а грамотрицательные — розовыми.

 

Упражнение 10.1

Вы проводите окрашивание по Граму, и когда вы изучаете бактериальные клетки под микроскопом, вы видите клетки розового цвета. Что это говорит вам?

Ответить

Упражнение 10.2

Вы проводите окрашивание по Граму, и когда вы изучаете бактериальные клетки под микроскопом, вы видите пурпурные клетки. Что это говорит вам?

Ответить

Упражнение 10.3

Вы проводите окрашивание по Граму, и когда вы наблюдаете бактериальные клетки под микроскопом, вы видите смешанные клетки пурпурного и розового цвета. Что это говорит вам?

Ответить

 

Окрашивание по Граму оказалось очень полезным для идентификации бактерий и прогнозирования того, какие антибиотики наиболее эффективны для уничтожения бактерий. Однако есть некоторые проблемы с техникой. Если процедура выполнена неправильно, результаты могут быть ошибочными. Таким образом, вам нужно будет практиковать технику, пока ваши результаты не будут удовлетворительными. Есть некоторые виды бактерий, такие как Mycobacterium tuberculosis или Legionella pneumophila

, которые обычно вообще не окрашиваются по Граму. Тем не менее, этот метод стал одним из тех, на которые в значительной степени полагаются микробиологи.

 

Таблица 2: Красители и реагенты, использованные при окрашивании по Граму.

Окрашивание/реагент для окрашивания по Граму	Цвет красителя/реагента	Роль красителя/реагента	Что делает краситель/реагент
кристаллический фиолетовый	фиолетовый	первичный краситель	окрашивает все клетки в фиолетовый цвет
Йод грамм	янтарный	протрава	присоединяется к кристаллическому фиолетовому с образованием более крупных комплексов, которые не позволяют кристаллическому фиолетовому оставлять толстые слои пептидогликана в стенках грамположительных клеток
этанол	прозрачный	обесцвечиватель	удаляет кристаллический фиолетовый из тонких слоев пептидогликана в стенках грамотрицательных клеток, оставляя грамотрицательные клетки прозрачными
сафранин	красный/розовый	контрастный краситель	цвет прозрачный Грамотрицательные клетки розовый

Рисунок 4: Стенки грамположительных клеток имеют единственную мембрану (плазматическую мембрану), окруженную толстым слоем сшитых пептидогликанов. Стенки грамотрицательных клеток имеют тонкий слой пептидогликана между плазматической мембраной и наружной мембраной. Когда грамположительные клетки и грамотрицательные клетки насыщаются кристаллическим фиолетовым (первый этап окрашивания по Граму), они становятся фиолетовыми. Когда йод Грама наносится на клетки, он заставляет кристаллический фиолетовый прочно прикрепляться к толстому пептидогликановому слою грамположительных клеточных стенок. В стенках грамотрицательных клеток протрава не прочно связывает кристаллический фиолетовый в тонком слое пептидогликана (хотя йод и кристаллический фиолетовый все еще реагируют и образуют большие комплексы). На третьем этапе окрашивания по Граму к клеткам добавляют обесцвечивающий агент — этанол. Этанол удаляет кристаллический фиолетовый из грамотрицательных клеток, поскольку кристаллический фиолетовый не прочно прилипает к тонкому слою пептидогликана, и клетки становятся прозрачными. Кристаллический фиолетовый не удаляется из грамположительных клеток, так как комплексы йод-кристаллический фиолетовый прилипают к толстому пептидогликановому слою.

Грамположительные клетки остаются фиолетовыми. На последнем этапе окрашивания по Граму сафранин используется в качестве контрастного красителя для окрашивания прозрачных клеток (грамотрицательных клеток) в розовый цвет. Конечным результатом являются грамположительные клетки, окрашенные в фиолетовый цвет, и грамотрицательные клетки, имеющие розовый цвет.

 

Упражнение 10.4

1. Сколько видов вы видите на этой окраске по Граму?
2. Какой грамм (положительный или отрицательный) у клеток?
3. Какова клеточная форма клеток (см. Морфология и расположение бактериальных клеток для справки)?

Ответить

Упражнение 10.5

1. Сколько видов вы видите на этой окраске по Граму?
2. Какой грамм (положительный или отрицательный) у клеток?
3. Какова клеточная форма клеток (см. Морфология и расположение бактериальных клеток для справки)?

Ответить

Упражнение 10.

6

1. Сколько видов вы видите на этой окраске по Граму?
2. Какой грамм (положительный или отрицательный) у клеток?
3. Какова клеточная форма клеток (см. Морфология и расположение бактериальных клеток для справки)?

Ответить

 

Усовершенствование метода окрашивания по Граму и устранение неполадок

Окрашивание по Граму требует практики. Это искусство в той же степени, что и наука. Если ваши результаты не получаются должными, скорректируйте процедуру, чтобы устранить проблему для будущих пятен.

Рис. 5: Если вы окрашиваете смесь грамотрицательных и грамположительных бактерий и не видите клеток, видите все клетки фиолетовым или видите все клетки розовым, это, вероятно, связано с одним из этих факторов. распространенные ошибки. (1) Если вы ничего не видите (клетки не видны), вероятно, мазок не был должным образом термофиксирован и бактерии смылись с предметного стекла во время окрашивания. (2) Если вы видите, что все ячейки окрашены в фиолетовый цвет, это означает, что шаг обесцвечивания был слишком коротким. В следующий раз, когда будете делать окрашивание по Граму, увеличьте время обесцвечивания. (3) Если вы видите, что все ячейки окрашены в розовый цвет, это означает, что этап обесцвечивания был слишком долгим. В следующий раз, когда будете делать окраску по Граму, уменьшите время обесцвечивания.

 

Факторы, которые необходимо контролировать для получения правильного результата окраски по Граму:

1. Приготовление мазка. Начинающие студенты склонны делать мазки слишком толстыми, нанося на предметное стекло слишком много инокулята. Это затруднит правильное обесцвечивание бактерий. Всегда наносите физиологический раствор или воду на предметное стекло до или после добавления бактерий при использовании культуры из твердой среды (на скошенной или чашке). Количество инокулята из твердой среды должно быть «точечным». Вы должны едва касаться организмов, которые хотите окрасить, петлей. ПРИМЕЧАНИЕ. При приготовлении мазков из жидкой среды не нужно наносить на предметное стекло физиологический раствор или воду.
2. Дайте мазку высохнуть на воздухе. Это означает, что слайд должен сидеть до тех пор, пока он не перестанет казаться влажным. Кроме того, вы можете использовать нагреватель для предметных стекол, чтобы высушить мазок. Подогреватель слайдов высушит слайд быстрее. При использовании подогревателя предметных стекол не спускайте глаз с мазка! Как только предметное стекло высохнет, снимите его с подогревателя. Если используется слишком много тепла, клеточная стенка организмов может деформироваться или разорваться и выпустить кристаллический фиолетовый краситель, когда он должен его удерживать. Экстремальный перегрев может привести к лизису всей клетки, и вы ничего не увидите под микроскопом.
3. Термофиксация прикрепит бактерии к предметному стеклу и убьет их. Если у вас нет клеток на предметном стекле, вероятно, этап термофиксации был пропущен или недостаточен для фиксации клеток на предметном стекле.
4. Свежесть и концентрация реактивов. Реагенты должны быть свежими, а концентрации должны быть точными.
5. Не удалось слить предметные стекла перед добавлением следующего реагента. После промывания предметного стекла водой и перед добавлением следующего реагента обязательно наклоните предметное стекло, чтобы лишняя вода стекла с него. Если вы оставите пузырек воды над бактериями, реагент, который вы добавляете, может никогда не достичь бактерий или он будет сильно разбавлен водой, присутствующей на предметном стекле.
6. Возраст бактериальной культуры. Старые грамположительные организмы теряют способность удерживать фиолетовый краситель по мере выхода из фазы экспоненциального роста.
7. Время этапа обесцвечивания. Это самый ответственный этап процедуры. Если обесцвечивание оставить на слишком долгое время, грамположительные микроорганизмы станут грамотрицательными. Если обесцвечиватель не оставить на достаточно долго, грамотрицательные микроорганизмы станут грамположительными. Толщина мазка будет определять, сколько времени вам потребуется для обесцвечивания. Точное время назвать невозможно. Вы должны обесцвечивать один мазок за раз и внимательно следить за ним. Когда с мазка начнет сходить цвет, следует смыть обесцвечиватель.
8.  

Примечание

Если вы смешаете слишком агрессивно, вы потеряете морфологию бактерий.

Примечание

Если нагреть слишком мало, бактерии смоются с предметного стекла. Если вы закрепите слишком много тепла, вы приготовите бактерии и денатурируете их

 

Лабораторные инструкции

противоположная сторона слайда, где вы будете наносить мазок. Это поможет вам позже найти мазок. Восковой карандаш лучше маркера, потому что он не так легко смоется со стекла.

Примечание

Если вы используете жидкую культуру, осторожно перемешайте ее, пока не получите однородную мутную смесь (она должна выглядеть как обезжиренное молоко). Если вы смешаете слишком агрессивно, вы потеряете бактериальную морфологию.

1. Приготовьте бактериальный мазок на предметном стекле:
   • Если вы берете бактерии из твердой культуры (с наклонной чашки или чашки Петри), поместите небольшую каплю (всего 1 каплю) физиологического раствора, деионизированной (DI) воды или дистиллированной воды на предметное стекло микроскопа и используйте петлю, чтобы асептически добавить бактерии в воду (избегайте брать большой кусок бактерий, так как клетки будут слишком плотными, чтобы увидеть отдельные клетки). Используйте петлю, чтобы распределить бактерии в капле воды и распределить каплю воды, чтобы сделать ее тоньше (она высохнет быстрее).
   • Если вы берете бактерии из жидкой культуры (бульона), поместите 1 или 2 полные петли бактерий прямо на предметное стекло микроскопа (без добавления солевого раствора или воды).
2. Дайте предметному стеклу высохнуть на нагревателе для предметных стекол (или на воздухе, если нагреватель для предметных стекол недоступен).

    

   Тепловая фиксация бактериального мазка

   После того, как жидкость полностью испарится с поверхности предметного стекла, выполните термофиксацию, пропуская предметное стекло:

   1. Прикрепите деревянный зажим к предметному стеклу микроскопа, чтобы закрепить его.
   2. Пропустите нижнюю часть предметного стекла через пламя три раза.
   3. Дайте предметному стеклу остыть, а затем продолжите процедуру окрашивания.

   Примечание

   Если нагреть слишком мало, бактерии смоются с предметного стекла. Если вы будете нагревать слишком много, вы сожжете бактерии и денатурируете их.

    

   Окраска по Граму

   1. Используйте предметные стекла, которые вы уже подготовили при создании бактериальных мазков и термофиксации (см. выше).
   2. Закрепите предметное стекло микроскопа деревянной скобой над ведром контейнера для отходов.
   3. Первичный краситель: Добавьте кристаллический фиолетовый (основной краситель) на мазок (нет необходимости покрывать красителем все предметное стекло). Оставьте пятно на мазке на 1 минуту.
   4. Промойте мазок деионизированной (ДИ) водой или дистиллированной водой.
   5. Стряхните лишнюю воду с мазка.
   6. Морилка: Добавить йод по Граму на мазок (нет необходимости покрывать все предметное стекло йодом). Оставьте на 1 минуту.
   7. Промыть деионизированной (DI) водой или дистиллированной водой.
   8. Стряхните лишнюю воду с мазка.
   9. Обесцвечиватель: Наклоните предметное стекло под углом 45° и дайте этанолу стекать по поверхности предметного стекла до тех пор, пока из мазка не исчезнет кристаллический фиолетовый цвет (время варьируется — не более 5-15 секунд).
   10. Наклоните предметное стекло под углом 45° и промойте мазок деионизированной (ДИ) водой или дистиллированной водой.
   11. Стряхните лишнюю воду с мазка.
   12. Контрастное окрашивание: Добавьте сафранин на мазок (нет необходимости покрывать красителем все предметное стекло) на 1 минуту.
   13. Промыть деионизированной водой.
   14. Стряхните лишнюю воду с мазка.
   15. Аккуратно промокните (не вытирайте) избыток воды с предметного стекла салфеткой.
   16. Поместите окрашенное предметное стекло в микроскоп и изучите. Обязательно начните с самой низкой мощности (ищите фиолетовые и розовые цвета пятен). Сфокусируйтесь на минимальном увеличении, а затем увеличивайте увеличение объектива на одно за раз.

    

   Результаты и вопросы

   1. Нарисуйте клетки, которые вы наблюдаете после окрашивания по Граму, в поле выше.
   2. Критикуйте свои рисунки в клетке:
      • Точно ли на рисунке показано, как выглядят клетки, когда вы смотрите в микроскоп (включая форму и расположение клеток)?
      • Точно ли на рисунке показан размер клетки, который вы видите в микроскоп?
      • Точно ли на рисунке показаны цвета, которые вы видите в микроскоп?
   3. После того, как вы изучили предметное стекло, показало ли оно, что окрашивание по Граму прошло успешно? Если вы увидели в смеси бактерий как грамположительные, так и грамотрицательные клетки, то ваша окраска по Граму прошла успешно. Если нет, то что вы видели (или не видели)?
   4. Если ваш ответ на вопрос 3. показал, что окраска по Граму не удалась, что могло произойти? Для получения помощи см. раздел «Улучшение и устранение неполадок метода окрашивания по Граму».
   5. Какова была клеточная форма грамположительных клеток, которые вы наблюдали (см. раздел «Морфология и расположение бактериальных клеток»)?
   6. Какова была клеточная форма грамотрицательных клеток, которые вы наблюдали (см. раздел «Морфология и расположение бактериальных клеток»)?
   7. Staphylococcus aureus — грамположительные виды, которые вы наблюдали сегодня. Что означает «грамположительный» в отношении структуры клеточной стенки S. aureus ?
   8. Escherichia coli — это грамотрицательный вид, который вы наблюдали сегодня. Что означает «граммотрицательность» в отношении структуры клеточной стенки Кишечная палочка ?
   9. Некоторые виды бактерий грамвариабельны. Что это значит?
   10. Что может произойти, если пропустить этап термофиксации?
   11. Что может произойти, если обесцвечивание слишком долгое?
   12. Что может произойти, если обесцвечивание слишком короткое?
   13. В чем разница между простым окрашиванием и дифференциальным окрашиванием?
   14. Является ли окрашивание по Граму простым окрашиванием или дифференциальным окрашиванием?

   Принадлежности

   • Пептидогликан клеточной стенки в Mycobacterium tuberculosis : Ахиллесова пята патогена, вызывающего туберкулез, Arundhati Maitra et al. под лицензией CC BY 4.0
   • Изображение главы: окраска по Граму 01.jpg от Y tambe находится под лицензией CC BY-SA 3.0
   • General Microbiology Lab Manual (Pakpour & Horgan) от Nazzy Pakpour & Sharon Horgan под лицензией CC BY-SA 4.0
   • Gram Stain.png от Paityn Donaldson находится под лицензией CC BY-SA 4.

     No related posts.